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色谱柱的清洗和再生方法

点击次数:1560      发布时间:2013-03-06

 

  除非特殊说明,在所有情况下,所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40-60倍。
  应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等,比较色谱柱性能的改善,以确定清洗的效果。
  确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与zui初清洗时所用的溶剂相溶。
  应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中zui后的溶剂相溶。
1正相填料
  用四氢呋喃冲洗。
  用甲醇冲洗。
  用四氢呋喃冲洗。
  二氯甲烷冲洗。
  用无苯正己烷冲洗。
2反相填料
  用HPLC级水冲洗,冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜(DMSO)。
  用甲醇冲洗。
  用氯仿冲洗。
  用甲醇冲洗。
3阴离子交换填料
  用HPLC级水冲洗。
  用甲醇冲洗。
  用氯仿冲洗。
4 阳离子交换填料
  用 HPLC 级水冲洗;在冲洗的过程中进4 等份200μl 的DMSO
  四氢呋喃冲洗。
5 蛋白质凝胶过滤填料
  去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
  弱保留蛋白质
  用30moL/L pH3.0 磷酸盐缓冲液冲洗。
  强保留蛋白质
  用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。
6多孔石墨化碳
  多孔石墨碳有四种再生的方法,选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
  酸碱再生
  适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
  将色谱柱倒装
  用50ml含0.1%三F乙酸的四氢呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
  用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
  用50ml含0.1%三F乙酸的四氢呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
  用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
  将色谱柱改为正向。
        作者:英国的R.Plumb-Glaxo
  强有机溶剂再生
  适合于水相分析极性或离子类分析物。
  用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
  用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
  用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
  用水冲冼至平衡。
  正相再生
  适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
  用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
  用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
  用50ml水以1ml/min流速冲洗。
  用50ml 0.1mol/L盐酸以1ml/min流速冲洗。
  用50ml水以流速1ml/min冲洗。
  用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
  用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
  用流动相冲冼至平衡。
       作者:瑞典的A.Karlsson-Uppsala
  三F乙酸的去除
  适合于流动相中含有三F乙酸的多孔石墨化碳柱。
  用加热到75℃的乙腈冲洗,同时色谱柱也要保持在这一温度。
7 带金属抗衡离子的聚合物填料
  基质是带金属抗衡离子的聚合物色谱柱,有三种再生方法,每种方法详细列于下表:
 

色谱柱类型
金属污染物
有机污染物
色谱柱清冼
氢离子型
用25℃的0.1mol/L的H2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
用65℃的20:80的ACN:0.01NH2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
钙离子型
用25℃的0.1mol/L pH6.3的Ca(NO3)2溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
钠离子型
用85℃的0.1mol/L 的NaNO3溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反相冲冼4小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
银离子型
没有再生过程的报导。
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
铅离子型
用85℃的pH 5.3的0.1M Pb(NO3)2溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4—16小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4小时
用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向冲冼4

 

 

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